{"id":6130,"date":"2018-05-21T20:45:43","date_gmt":"2018-05-21T18:45:43","guid":{"rendered":"http:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/?p=6130"},"modified":"2018-05-21T20:46:07","modified_gmt":"2018-05-21T18:46:07","slug":"determinacion-de-salmonella-en-aguas-residuales","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/mediambient\/determinacion-de-salmonella-en-aguas-residuales\/","title":{"rendered":"Determinaci\u00f3n de Salmonella en aguas residuales"},"content":{"rendered":"<p><a href=\"http:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/625x470_538e7400b937957c7223e171_3_23-1401844914754.jpg\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"wp-image-6179 aligncenter\" src=\"http:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/625x470_538e7400b937957c7223e171_3_23-1401844914754.jpg\" alt=\"\" width=\"358\" height=\"269\" srcset=\"https:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/625x470_538e7400b937957c7223e171_3_23-1401844914754.jpg 625w, https:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/625x470_538e7400b937957c7223e171_3_23-1401844914754-300x226.jpg 300w, https:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/625x470_538e7400b937957c7223e171_3_23-1401844914754-200x150.jpg 200w\" sizes=\"auto, (max-width: 358px) 100vw, 358px\" \/><\/a><\/p>\n<p>El g\u00e9nero Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Son bacilos gram negativos, de 0,7-1,5 x 2-5 \u03bcm, anaerobios facultativos, no formadores de esporas, generalmente m\u00f3viles por flagelos per\u00edtricos. Las bacterias crecen \u00f3ptimamente a 37\u00b0C y pueden catabolizar la D-glucosa y otros carbohidratos con producci\u00f3n de \u00e1cido y gas.<\/p>\n<p>Fermentan glucosa, maltosa y manitol, pero no fermentan lactosa ni sacarosa. Son generalmente catalasa positiva, oxidasa negativa y reducen nitratos a nitritos. La mayor\u00eda de estas caracter\u00edsticas se utilizan para la identificaci\u00f3n bioqu\u00edmica de cepas aisladas de Salmonella. <!--more--><\/p>\n<ul style=\"list-style-type: square;\">\n<li>\n<h3>Objectivos<\/h3>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>Analizar una muestra de agua contaminada (Residual Urbanas). Incubar Salmonella en dos etapas de pre-enriquecimiento, enriquecimiento y luego sembrar en agar XLD. Y ver si se forman colonias de Salmonella.<\/p>\n<ul style=\"list-style-type: square;\">\n<li>\n<h3>Fundamento<\/h3>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>Primero haremos preenriquiment no selectivo de la muestra de agua con agua de peptona. Con ello conseguimos el crecimiento de aquellas colonias de Salmonella que puedan estar lesionadas, incrementando su vitalidad y adquiriendo las condiciones fisiol\u00f3gicas necesarias para su \u00f3ptimo crecimiento y desarrollo posterior. Este medio no es inhibidor de la flora acompa\u00f1ante.<br \/>\nDespu\u00e9s haremos el enriquecimiento selectivo en caldo Rappaport-Vassiliadis que es un medio diferencial. Contiene peptona como fuente de carbono y nitr\u00f3geno, MgCl<sub>2<\/sub> para elevar la presi\u00f3n osm\u00f3tica del medio, ver malaquita como inhibidor de otros microorganismos, el pH de medio se (5,1 \u00b1 0,2). El pH bajo, combinado con la presencia de verde malaquita y la alta concentraci\u00f3n de MgCl<sub>2<\/sub>, incrementa la presi\u00f3n osm\u00f3tica, tiene car\u00e1cter selectivo para Salmonella, ya que es capaz de crecer en estas condiciones respecto a otras enterobacterias, aunque otras enterobacterias pueden crecer ligeramente como Shigella.<br \/>\nAl final haremos una siembra en placa en agar XLD (Xilosa-Lisina-Desoxicolat), un medio selectivo y diferencial utilizado para la diferenciaci\u00f3n de enterobacterias especialmente de Salmonella y Shigella. El agar XLD contiene extracto de levadura, lactosa y sacarosa como fuente de nutrientes y vitaminas; utiliza el desoxicolat de sodio como agente selectivo, inhibiendo los microorganismos gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan pr\u00e1cticamente todos los enterobacterias, produciendo \u00e1cido y haciendo girar el rojo de fenol en color amarillo.<br \/>\nEn este medio Los enterobacterias fermentan xilosa produciendo \u00e1cido y se quedan de color amarillo. La Shigella \u00fanicamente utiliza Lisina y se queda de color rojo. Salmonella primer fermenta xilosa quedando de color amarillo, cuando termina xilosa comienza a utilizar Lisina y se queda de color rojo. Por eso se pone tiosulfato de sodio en medio que salmonela puede utilizar produciendo H<sub>2<\/sub>S que reacciona con citrato f\u00e9rrico produciendo un precipitado negro. As\u00ed podemos distinguir las colonias de Salmonella de color negro.<br \/>\nLos colores finales son: (Enterobacterias = Amarillo \/ incolora) \/ (Shigella = Rojo) \/ (Salmonella = Negro <span style=\"color: #808080;\"><em>(Figura 1)<\/em><\/span>)<\/p>\n<ul style=\"list-style-type: square;\">\n<li>\n<h3>Materiales<\/h3>\n<p>Tubos de ensayos, placas de petri, asa de siembra, mechero bunsen, micro-pipeta, pipum, pipeta graduada.<\/li>\n<\/ul>\n<ul style=\"list-style-type: square;\">\n<li>\n<h3>Reactivos<\/h3>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p><strong>Agua de Peptona:<\/strong> El agua de peptona tamponada se utiliza para el pre-enriquecimiento no selectivo de Salmonella. Contiene: Peptona, Cloruro de sodio, Fosfato dis\u00f3dico y Fosfato mono pot\u00e1sico.<\/p>\n<p><strong>Soluci\u00f3n Ringer:<\/strong> Soluci\u00f3n isot\u00f3nica que sirve para la conservaci\u00f3n de la bacteria.<\/p>\n<p><strong>Caldo Rappaport-Vassiliadis:<\/strong> Es un medio l\u00edquido para el enriquecimiento selectivo de Salmonella a partir de carne<br \/>\nvacuna y productos l\u00e1cteos, heces y agua contaminada. Contiene: Triptona, Cloruro s\u00f3dico, Fosfato mono pot\u00e1sico, Cloruro de magnesio anhidro y Oxalato de verde malaquita.<\/p>\n<p><strong>Agar XLD:<\/strong> El Agar XLD (Agar Xilosa, Lisina y Desoxicolato) es un medio moderadamente selectivo y diferencial para el aislamiento y diferenciaci\u00f3n de microorganismos Gramnegativos ent\u00e9ricos pat\u00f3genos (Salmonella y Shigella).<\/p>\n<ul style=\"list-style-type: square;\">\n<li>\n<h3>Procedimiento<\/h3>\n<\/li>\n<\/ul>\n<ul style=\"list-style-type: circle;\">\n<li><strong>Pre-enriquecimiento<\/strong><br \/>\n<strong>I.<\/strong> Poner 20ml de agua de peptona 20g\/L en tres tubos de ensayo-<br \/>\n<strong>II.<\/strong> Poner estos tubos en autoclave a 121\u00baC para 15 minutos para esterilizar.<br \/>\n<strong>III.<\/strong> Mientras tanto encender mechero bunsen para asegurar zona de esterilidad de unos 40cm de radio.<br \/>\n<strong>IV.<\/strong> Despu\u00e9s de 15 minutos sacar los tubos de autoclave y dejar enfriar en zona de esterilidad.<br \/>\n<strong>V.<\/strong> Mientras los tubos de agua de peptona est\u00e1n enfriando hay que preparar otros 3 tubos en condiciones de esterilidad.<br \/>\n<em>a) Poner 10ml de agua de problema y rotular &#8220;Muestra Directa&#8221; o (MD)<\/em><br \/>\n<em>b) Poner 9ml de soluci\u00f3n Ringer y 1ml de &#8220;Muestra Directa&#8221; y rotular (1\/10).<\/em><br \/>\n<em>c) Poner 9ml de soluci\u00f3n Ringer y 1ml de tubo (1\/10) y rotular (1\/100).<\/em><br \/>\n<strong>VI.<\/strong> De tubo de (&#8220;MD&#8221;,&#8221;1\/10&#8243; y &#8220;1\/100&#8221;) coger 1ml de inoculo con micropipeta y poner en tubos de agua de peptona y marcar con diluci\u00f3n correspondiente.<br \/>\n<strong>VII.<\/strong> Poner los tubos de agua de peptona en un vaso de precipitado y dejarlos en estufa a 37\u00baC para 18h.<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<ul style=\"list-style-type: circle;\">\n<li><strong>Enriquecimiento<\/strong><br \/>\n<strong>I.<\/strong> Poner en 3 tubos de ensayo 10ml de caldo Rappaport-Vassiliadis en condiciones de esterilidad.<br \/>\n<strong>II.<\/strong> Sacar los tubos de agua de peptona de estufa.<br \/>\n<strong>III.<\/strong> Coger 1ml de tubos de agua de peptona y poner en tubos de caldo R-V y marcar la diluci\u00f3n correspondiente.<br \/>\n<strong>IV.<\/strong> Dejar los tubos de caldo R-V en estufa a 42\u00baC para 24h.<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<ul style=\"list-style-type: circle;\">\n<li><strong>Siembra en Agar XLD<\/strong><br \/>\n<strong>I.<\/strong> Coger 3 placas de Petri y poner agar XLD en la placa Petri.<br \/>\n<strong>II.<\/strong> Dejar solidificar el agar en condiciones de esterilidad.<br \/>\n<strong>III.<\/strong> Cuando el agar esta frio coger un inoculo de tubos de caldo R-V con nansa de siembra y sembrar sobre las placas en forma de triple estar\u00eda.<br \/>\n<strong>IV.<\/strong> Dejar las placas en estufa a 37\u00baC para 24 horas.<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p style=\"text-align: left;\">&#8211; Resultados positivos de Salmonella en Agar XLD. <em>(Figura 1). Los resultados se dan en agua positiva o negativa en Salmonella.<\/em><\/p>\n<figure id=\"attachment_6144\" aria-describedby=\"caption-attachment-6144\" style=\"width: 350px\" class=\"wp-caption aligncenter\"><a href=\"http:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/xldgensalmonella.jpg\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"wp-image-6144 size-full\" src=\"http:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/xldgensalmonella.jpg\" alt=\"\" width=\"350\" height=\"349\" srcset=\"https:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/xldgensalmonella.jpg 350w, https:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/xldgensalmonella-150x150.jpg 150w, https:\/\/agora.xtec.cat\/ies-merce-rodoreda\/wp-content\/uploads\/usu644\/2018\/05\/xldgensalmonella-300x300.jpg 300w\" sizes=\"auto, (max-width: 350px) 100vw, 350px\" \/><\/a><figcaption id=\"caption-attachment-6144\" class=\"wp-caption-text\">Figura 1: Resultados Positivos en Salmonella<\/figcaption><\/figure>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>El g\u00e9nero Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. 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